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ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等

完好的ELISA試劑盒包含以下各組分：

1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)

2.酶符號(hào)的抗原或抗體(結(jié)合物)；

3.酶的底物；

4.陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考規(guī)范品和控制血清(定量測(cè)定中)；

5.結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；

6.洗刷液

7.酶反響停止液。

ELISA試劑盒操作過(guò)程：

1. 加規(guī)范品：在酶標(biāo)包被板上設(shè)規(guī)范品孔，依次參加不同濃度的規(guī)范品50ul(主張每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl，然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗刷液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗刷：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：除空白孔外每孔參加酶標(biāo)試劑50μl。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗刷：操作同5。

9. 顯色：ELISA試劑盒每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響(此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。